Dendrobium_

Bradford assay 적갈색인 Commassie Brilliant Blue G-250 시약이 단백질을 만나면 파랗게 변하게 되는데 그 정도를 흡광도로 측정해서 단백질의 양을 구할 수 있다. 반응이 매우 빠르고, 민감도가 높아 가장 흔하게 사용되는 단백질 정량법 중 하나이다. 그러나 salt, detergent, lipid 등에 의해 정량값에 영향을 받을 수 있으므로 주의해야 한다. ex) SDS, triton X-100 목적 단백질 정량, 즉 샘플 內 단백질의 양을 아는것이 이 실험의 목적이다. 우리 실험실에서는 때로 특정 약물이 아닌, 단백질이 주 성분인 물질을 세포에 처리하기도 하는데 이때 각 실험마다 일정한 농도의 물질을 처리하기 위해 단백질 정량을 한다. ​ 원리 기본적으로 단백질은 pH 환..

세포는 배지 속에서 자라는 위치에 따라 크게 Adherent cell(부착성 세포)와 Suspension cell(부유성 세포)로 나눌 수 있다. 앞에 semi-를 붙이면 일부가 부착/부유 한다는 것이다. 부착성 세포는 보통 아래 그림처럼 납작하고 끝이 길어진 형태를 하고있고, 부유성 세포는 그에 비해 둥근 모양을 한 것이 특징이다. 대부분의 세포는 부착성 세포이다. 이와 같은 형태에 따라 계대배양을 하는 방법에 차이가 있다. 우선, 배지 데우기! 냉장보관 된 배지를 필요한 만큼 50 ml cornical tube에 덜어서 warm bath에서 데워준다. (귀찮^^지만 우리의 세포들은 37ºC에서 자라니까요~) 1. Adherent cells(부착성 세포) ▶ 부착성 세포는 plate의 바닥에 붙어서 자..

Griess assay NO production quantitive analysis로, 물질처리 한 세포 sample에서 얼마나 많은 NO가 분비되었는지 측정한다. (LPS를 세포에 처리하여 염증환경을 만든다) LPS를 세포에 처리하면 아래 그림처럼 TLR4(Toll-like receptor 4)를 경유하여 대식세포에 activity signal을 보내고, 여러가지 pro-inflammatory mediators를 분비하게 된다. 대표적으로 NO, TNF-a, IL-6 등이 있는데 TNF-a, IL-6 같은 cytokine은 보통 ELISA로 측정한다. ( 이미지 출처: 3,4 Dihydroxytoluene, a metabolite of rutin, inhibits inflammatory response..

MTT assay 살아있는 세포를 측정하는 가장 직접적인 방법은 세포를 염색한 후 cell count 하는 방법이다. 그러나 시간과 노력이 많이 필요하고, 연구자에 따라 정확도가 달라진다는 단점이 있다. 이를 대체 할 방법으로 가장 많이 선택되는 실험이 바로 MTT assay이다. 목적 세포 활성 및 독성 평가. MTT assay는 물질에 대한 세포의 반응을 연구하기 위한 실험에서 보통 가장 먼저 진행하는 실험이다. 세포의 생존률을 측정하기 때문에 어떤 물질을 처리한 후 세포에 어떤영향을 끼치는지 대략적으로 알 수 있기 때문이다. 우리 실험실에서는 가설 설정 후, MTT assay를 하면서 1. cytotoxic한 농도 범위 파악 2. 농도를 훨씬 낮춰서 subcytotoxic한 농도범위 파악 -> 앞으..